复合乳酸菌制剂对预防断奶仔猪细菌性腹泻及生长性能的影响.pdf
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1、第 30 卷 第 4 期 天 津 农 学 院 学 报 Vol.30,No.4 2023 年 8 月 Journal of Tianjin Agricultural University August,2023 收稿日期:2022-03-07 基金项目:青海省重点研发与转化计划科技援青合作专项(2021-QY-204);天津市生猪产业技术体系创新团队(ITTPRS2023006);天津市大创项目(202010061044);天津市绿色生态饲料重点实验室开放课题(TJ202301)作者简介:杜丽欣(2000),女,本科在读,主要从事益生菌改良研究。E-mail:。通信作者:洪亮(1991),男,讲
2、师,博士,主要从事抗生素替代剂方面研究。E-mail:。文章编号:1008-5394(2023)04-0046-07 DOI:10.19640/ki.jtau.2023.04.009 复合乳酸菌制剂对预防断奶仔猪细菌性腹泻及生长性能的影响 杜丽欣,张峰瑞,邹雪,韩慕蓉,张建斌,洪亮通信作者(天津农学院 动物科学与动物医学学院 天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300392)摘 要:本研究旨在评估植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,LP)与罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,LR)复合乳酸菌制剂作为饲料添加剂对预防断奶仔猪细菌性腹泻的效果
3、及对生长性能的影响。将 12 头 28 日龄、体重(6.771.30)kg 的断奶三元仔猪,分为两组,每组 6 个重复,每个重复 1 头猪。028 d 对照组仔猪饲喂基础日粮,014 d 在试验组仔猪基础日粮中添加复合乳酸菌制剂1 109 CFU/kg,1528 d 添加复合乳酸菌制剂 5108 CFU/kg。试验期 28 d。每周记录体重,每天记录采食量并通过粪便评分评估腹泻发生率,计算腹泻指数。在 14 d 和 28 d 采集粪样进行乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)和大肠型细菌(coliform bacteria)计数。结果表明:与对照组相比添加复合益生菌制剂的断
4、奶仔猪平均日增重、采食量和饲料转化率有改善的趋势,无显著性差异(P0.05),但其肠道 LAB 数量显著增加(P0.05),大肠型细菌数量显著降低(P0.05)。饲喂添加复合乳酸菌制剂的饲料后,断奶仔猪肠道 LAB 与大肠型细菌数量比率显著增加(P0.05),粪便指数、腹泻率和腹泻指数显著降低(P0.05),且在 1528 d 基础日粮中添加 LP 和 LR 各 5108 CFU/kg时,维持了 014 d 预防断奶仔猪腹泻的效果。关键词:复合乳酸菌制剂;断奶仔猪;生长性能;细菌性腹泻;相关性 中图分类号:S828.5 文献标识码:A Effect of compound lactic aci
5、d bacteria on prevention of bacterial diarrhea and growth performance of weaned piglets Du Lixin,Zhang Fengrui,Zou Xue,Han Murong,Zhang Jianbin,Hong LiangCorresponding Author(Tianjin Key Laboratory of Agricultural Animal Breeding and Healthy Husbandry,College of Animal Science and Veterinary Medicin
6、e,Tianjin Agricultural University,Tianjin 300392,China)Abstract:The purpose of this study was to evaluate the effects of compound lactic acid bacteria,LP(Lactobacillus plantarum)combined with LR(Lactobacillus reuteri)as feed additive on the prevention of bacterial diarrhea and growth performance of
7、weaned piglets.Twelve 28-day-old weaned piglets with an average body weight of(6.771.30)kg were divided into two groups with 6 replicates per group and 1 pig per replicate.The piglets in the control group were fed with basic diet from 0 to 28 days;1109 CFU/kg compound lactic acid bacteria preparatio
8、n were added to the basic diet of piglets in the experimental group for 014 days and 5108 CFU/kg compound lactic acid bacteria preparation for 1528 days.The experiment lasted for 28 days.Body weight was measured weekly and feed intake was checked every day.The incidence of diarrhea was assessed dail
9、y by stool score and diarrhea index was calculated.Fecal samples were collected at 14th and 28th days for the counting of lactic acid bacteria and coliform bacteria.The results showed as follows:compared with the control group,the ADG,ADFI and FCR of weaned piglets supplemented with compound lactic
10、acid bacteria preparation had a trend of improvement(P0.05),the number of intestinal LAB(lactic acid bacteria)was significantly increased(P0.05)and intestinal coliform bacteria was significantly decreased(P0.05).The ratio of intestinal LAB to coliform bacteria was significantly increased(P0.05).In a
11、ddition,fecal consistency score,diarrhea incidence and diarrhea index were significantly decreased(P0.05)after weaned piglets were fed diets supplemented with compound lactic acid bacteria preparation.The fecal consistency score,diarrhea incidence and diarrhea index of weaned piglets decreased signi
12、ficantly when LP and LR were added 5108 CFU/kg respectively in the basic diet.Key words:compound lactic acid bacteria preparation;weaned piglets;growth performance;bacterial diarrhea;correlation 在养猪业,断奶仔猪腹泻是最常见的疾病,仔猪断奶后由于食物和环境改变,其肠道屏障功能减弱、机体代谢和免疫力下降,可能会增加病原菌在肠道菌群的占比,从而引起腹泻,严重会导致仔猪死亡,继而给养殖户带来重大经济损失1。
13、为了预防断奶仔猪腹泻,许多养殖户在饲料中添第 4 期 杜丽欣,等:复合乳酸菌制剂对预防断奶仔猪细菌性腹泻及生长性能的影响 47加抗生素。而抗生素的使用会破坏肠道菌群平衡并导致细菌产生耐药性2,给动物健康带来不利影响,甚至会残留在畜产品中,危害人体健康。国家农业农村部公告第 194 号中规定从 2020 年 1 月1 日起实施全面“禁抗”,抗生素替代剂的研发引起畜牧业广泛关注。通过关于替抗物质的大量研究,发现益生菌具有安全和不污染环境等优点3,可以解决细菌耐药性和药物残留的问题,增加宿主肠道中有益微生物的数量并促进动物肠道健康4。因此,益生菌作为饲料添加剂被广泛应用于畜牧业。有研究表明,乳酸菌在
14、促进营养物质吸收和增强机体免疫力方面有一定作用5,且能与肠道病原菌竞争定殖使肠道微生物群达到平衡。因此,乳酸菌被广泛应用于改善断奶仔猪应激现象6。乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是最主要的饲用益生菌之一7,其为革兰氏阳性菌,呈过氧化氢酶阴性,主要包括乳杆菌属、乳球菌属、双歧杆菌属、链球菌属和肠球菌属等。随着对饲料中添加单一乳酸菌的研究越来越多,有研究表明 LP 和 LR 对肠道病原菌有竞争抑制、刺激宿主免疫系统、改善仔猪早期肠道屏障功能、有效预防腹泻等作用8-9。为了寻求效果更好的乳酸菌添加剂,越来越多关于复合乳酸菌作为饲料添加剂的研究开始出现10。本试验旨在将LP
15、与 LR 复合乳酸菌制剂作为替抗饲料添加剂,探究肠道乳酸菌与大肠型细菌是否有竞争关系,评估其在预防断奶仔猪细菌性腹泻方面的效果,以期为复合乳酸菌制剂的应用提供数据参考。1 材料与方法 1.1 试验材料 试验乳酸菌:试验用 LP 和 LR 均分离于健康仔猪粪便,纯化后保存于天津农学院动物营养实验室。复合菌:培养 LP 和 LR 的单一菌落至对数生长期,乳酸菌培养液以 4 000 r/min 离心 15 min,去其上清液后称重,添加(W/V)10%脱脂牛奶后进行冷冻干燥。014 d 在基础日粮中添加复合乳酸菌制剂 1109 CFU/kg,占饲料重 0.1%,1528 d 添加量减半,为 5108
16、 CFU/kg,占饲料重 0.05%。1.2 试验动物及试验设计 本试验于天津强源康农业科技有限公司附属猪场进行,选取 12 头 28 日龄断奶平均初始体重为(6.771.30)kg 的三元仔猪。根据初始体重均衡的原则将其分成 2 组,为对照组和试验组,每组 6 个重复,每个重复 1 头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加复合 LAB 制剂的基础日粮。1.3 基础日粮与饲养管理 试验中所用的基础日粮为天津胜腾饲料有限公司生产,表 1 为饲料营养成分。试验前对猪舍进行彻底清扫消毒,并空栏 7 d。试验期间,猪舍进行全封闭式管理,保持猪舍卫生、通风、干燥。温度控制在 2527。对照组和试验组同舍
17、饲养,分别饲养于两栏中,通过耳标进行个体识别,自由采食与饮水。每天定时观察仔猪的情况并记录其腹泻的相关数据,试验期共 28 d。表 1 仔猪基础日粮的营养成分表%营养成分 014 d 1528 d 水 12.5 12.5 粗蛋白质 20.0 18.0 粗脂肪 4.0 4.0 粗灰分 8.0 7.0 赖氨酸 1.4 1.3 氯化钠 0.30.8 0.30.8 钙 0.51.1 0.71.0 磷 0.4 0.7 1.4 测定指标与方法 1.4.1 生长性能 每头猪在 0 d、7 d、14 d、21 d 和 28 d 空腹称重,记录每天采食量,分别计算对照组和试验组014 d、1528 d、028
18、d 平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和饲料转化率(FCR)。1.4.2 肠道 LAB 以及大肠型细菌测定 在 14 d 和 28 d 早上采集每头猪的新鲜粪便,分别放在有编号的塑料袋中,保存在有冷冻冰的泡沫箱中,立即送到实验室进行微生物计数。称取适量粪样于2 ml离心管中,用1 ml蒸馏水稀释,依次稀释四个梯度 10-110-4,分别取 0.01 mL 接种于 MRS 琼脂培养基和麦康凯培养基上,每个稀释度 3 个重复,37 培养 20 h 后进行计数。菌落的数量以每克鲜猪粪样中所含微生物的对数值(log)表示(CFU/g)。天 津 农 学 院 学 报 第 30 卷 481.4.
19、3 腹泻指标 试验通过粪便指数、腹泻率和腹泻指数三个指数表示仔猪腹泻情况。粪便指数:0 分-正常粪便(固体);1 分-湿粪(半固体);3 分-稀便(轻度腹泻);5 分-水样粪便(严重腹泻)。轻度腹泻和重度腹泻均视为腹泻。腹泻率和腹泻指数的计算方式如下。腹泻率:腹泻的天数/总试验天数 腹泻指数:总粪便指数/总试验天数11 1.5 数据分析与处理 试验数据用 Excel 软件进行处理后,采用GraphPad Prism 软件进行 t 检验分析,结果用平均值标准差表示。P0.05 表示差异不显著,P0.05 为具有显著性差异,P0.01 为具有极显著性差异。通过最小二乘法求 14 d 和 28 d
20、仔猪的体重和ADG与肠道 LAB 的回归方程,并进行相关性分析。2 结果 2.1 复合 LAB 对断奶仔猪生长性能的影响 通过表 2 可知对照组和试验组断奶仔猪的平均体重差距逐渐增大。试验期结束时与对照组相比,饲喂复合 LAB 断奶仔猪的平均体重增加了1.84 kg。0 d 时,试验组的断奶仔猪体重最小值小于对照组体重最小值,14 d 时,试验组断奶仔猪体重最小值与对照组接近,21 d 时,试验组的断奶仔猪体重最小值超过对照组。表明在基础日粮中添加复合 LAB 后,提高了断奶仔猪的生长性能,体重增加更快。与对照组相比,试验组的断奶仔猪采食量增加(P0.05),FCR有所降低(P0.05)。表明
21、在基础日粮中添加复合 LAB 可提高断奶仔猪的采食量并改善其FCR。表2 对照组及试验组断奶仔猪每周体重与前两周、后两周和试验期平均日增重、平均日采食量、饲料转换率差异显著性分析 参数 对照组 试验组 P值 0 d BW 6.781.22 6.781.50 0.991 8 7 d BW 9.171.57 9.441.80 0.778 4 14 d BW 11.982.16 12.702.05 0.567 8 21 d BW 15.552.86 17.042.52 0.355 1 28 d BW 19.503.57 21.322.79 0.345 6 The total weight/kg 12
22、.722.48 14.541.56 0.158 5 014 d ADG/kg 0.370.08 0.420.07 0.278 4 ADF/kg 0.730.16 0.810.19 0.386 9 FCR 2.050.45 1.960.32 0.672 9 1528 d ADG/kg 0.540.11 0.610.06 0.343 3 ADF/kg 1.190.15 0.390.12 0.008 7*FCR 2.280.44 2.270.24 0.978 5 028 d ADG/kg 0.450.09 0.520.06 0.513 9 ADF/kg 0.730.23 0.840.27 0.135
23、 6 FCR 1.670.33 1.630.19 0.758 6 注:与空白对照组(饲喂基础日粮)相比,同行数据后标记*(P0.05)、*(P0.01)或*(P0.001)表示差异显著,没有标记表示差异不显著(P0.05)。下同 2.2 复合 LAB 对断奶仔猪肠道 LAB 以及大肠型细菌的影响 图 1 中,饲喂复合 LAB 两周后的断奶仔猪肠道菌群中 LAB 数量与对照组相比显著增多(P0.01),大肠型细菌数量明显减少(P0.05),但无显著性差异;饲喂复合 LAB 四周后的断奶仔猪肠道菌群中的 LAB 和大肠型细菌数量与对照组相比差异均显著(P0.05)。图 2 中,与对照组相比,饲喂复
24、合 LAB 两周后(A)和四周后(B)的断奶仔猪肠道 LAB 与大肠型细菌数量比率均有显著性差异。饲喂复合 LAB 的断奶仔猪肠道 LAB 与大肠型细菌数量比率显著增加,表明饲料中添加复合 LAB 能有效减少大肠型细菌数量,肠道 LAB对大肠型细菌竞争抑制作用增强,肠道病原菌被更有效抑制。第 4 期 杜丽欣,等:复合乳酸菌制剂对预防断奶仔猪细菌性腹泻及生长性能的影响 49 图 1 对照组与试验组断奶仔猪肠道LAB数与大肠型细菌数差异显著性分析 注:(A)饲喂复合 LAB 两周后肠道 LAB 及大肠型细菌数;(B)饲喂复合 LAB 四周后肠道 LAB 及大肠型细菌数 图 2 对照组与试验组断奶仔
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