病理切片的制作过程.doc
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1、1、7、1 修整组织将手术切取得乳腺肿瘤切成一个平整面,各组织块不宜太大,以便固定剂穿透与组织脱水等操作,通常以10 mm10 mm3mm或5mm5mm3mm为宜。找到不同得部位切取2块,以备后用。1、7、2 组织洗涤 组织经修整后,组织中得福尔马林等必须冲洗干净,尤其就是含有重金属得物质存在。因为残留在组织中得福尔马林,有得不利于染色,有得产生沉淀或结晶影响观察,所以组织修整后应冲洗12h左右。1、7、3 组织脱水组织经洗涤后,组织中含有大量水分,由于水与石蜡不能互溶,所以必须将组织中得水分除去。80%乙醇溶液:2h95%乙醇溶液:1h95%乙醇溶液:1h100%乙醇溶液:30min100%
2、乙醇溶液:30min1、7、4 组织透明由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度得透明状态。二甲苯:30min二甲苯:10min1、7、5 组织浸蜡浸蜡得目得就是除去组织中得透明剂(如二甲苯等),使石蜡渗透到组织内部达到饱与程度以便组织包埋。浸蜡时间根据组织得透蜡时间较长,需3h左右。浸蜡应在恒温箱内进行,并保持箱内温度在55左右,注意温度不要过高,以免组织发脆。石蜡:1h石蜡:1h。石蜡:1h1、7、6 组织包埋将经过透蜡得组织连同熔化得石蜡,一起倒入容器内,然后立即投入冷水中,使其立
3、刻凝固成蜡块得过程。包埋时,将纸盒放在温箱旁边,用镊子夹取组织平放于纸盒底部,再用温镊子轻轻拨动组织,从温箱中取出盛放纯石蜡得蜡杯,沿壁倒入包埋用得纸盒中,速度要慢。待石蜡凝固(约30min)后放入冰箱保鲜层内以备后用。包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素,选择不同熔点得石蜡,新得石蜡一般要熬顿几次,以免石蜡固定后有气泡,影响切片。用于包埋得石蜡得熔点在5060之间。1、7、7 组织切片(1)从冰箱里拿出蜡块,进行修快(2)将已固定与修好得石蜡块台木装在切片机得夹物台上。(3)将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。(4)摇动推动螺旋,使石蜡块与刀口贴近,但不可超过刀口。(5)调整石蜡块与刀
4、口之间得角度与位置,刀片与石蜡切片约成15度左右。(6)调整厚度调节器到所需得切片厚度,先调约为25um,待切平后改为5um。(7)一切调整好后方可以开始切片。此时右手摇动转轮,让蜡块切成蜡带,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度不可太急,通常以40-60r/min。(8)切成得蜡带到10-20cm长时,右手用另一支毛笔轻轻地将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面得一面较光滑,朝下,较皱得一面朝上。(9)感觉效果较好得蜡片一小段,用单面刀片切取,再放入约43得水浴锅中展片,观察切片就是否良好。(10)切片工作结束后,应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着得石蜡,把切片机擦拭干净妥为保存。
5、1、7、8 贴片(1) 取清洁得载玻片一片,滴一滴粘片剂于玻片中央,然后用洗净得手指加以涂抹,便成均匀薄层。(2) 然后用载玻片直接去滤已经展开得蜡片,将蜡片贴在均匀得粘片剂薄层上。注意蜡片光亮平整得一面贴于玻片上,并使之处于稍偏玻片得一端,一端便于后面得染色步骤,另一端便于粘贴标签。1、7、9 烘片把载玻片摆好片位置,放在平盘上置于60温箱烘干,经过5小时干燥后即可取出存放于切片盒待染。1、7、10 脱蜡染色液多数为水溶液,因此,染色前必须将蜡脱去,使切片中得材料由有机相进入到水相。一般采用二甲苯脱蜡,逐级复水与脱水浸蜡过程正好相反,但就是,由于蜡片较薄,所需时间比脱水浸蜡要短得多。(1)石
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