伏立康唑治疗药物监测方法的建立及其在结核病合并真菌感染患者中的应用.pdf
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1、DOI:10.13493/j.issn.1672-7878.2023.10-0014伏立康唑治疗药物监测方法的建立及其在结核病合并真菌感染患者中的应用韩珂卿*1,王子嫣,来永炜,仵倩红*2陕西省结核病防治院,西 安 710100【摘要】目的:建立基于超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定人血中伏立康唑的浓度,并将此法应用于结核病合并真菌感染患者,为该类患者的抗真菌治疗提供参考。方法:色谱柱为 ACQUITY UPLCHSS T3C18 柱(2.1 mm50 mm,1.8 m),流动相为乙腈(A)-水(含0.1%甲酸)(B),梯度洗脱曲线为 6,流速为 0.3 mL/min,梯度洗
2、脱,内标为加替沙星,电喷雾离子源,多反应离子监测模式,正离子模式检测,伏立康唑和加替沙星离子对 m/z分别为 350.138/127.08、376.2/332.1;采用该方法对医院结核患者的伏立康唑血药浓度进行监测。结果:伏立康唑在 0.1021.7 g/mL 浓度范围内与相对峰面积线性关系良好(r0.993 1),稳定性、提取回收率和基质效应相对标准差(relative standard deviation,RSD)6%。结论:基于 UPLC-MS/MS 的方法可以简单、快速、准确地测定人血中伏立康唑的浓度,为真菌感染患者用药的安全性和有效性提供了有力依据。【关键词】伏立康唑;治疗药物监测;
3、超高效液相色谱串联质谱;真菌感染;结核病【中图分类号】R 97;R 52【文献标志码】A【文章编号】1672-7878(2023)10-1076-05Establishment of Voriconazole Therapeutic Drug Monitoring Method andIts Application in Tuberculosis Patients Complicated with Fungal InfectionHAN Ke-qing*1,WANG Zi-yan,LAI Yong-wei,WU Qian-hong*2Shaanxi Provincial Tuberculosi
4、s Prevention and Control Hospital,Xian 710100,ChinaABSTRACTObjective:To establish a method based on ultra performance liquid chromatography tandem massspectrometry(UPLC-MS/MS)to determine the concentration of voriconazole in human blood,and apply this method totuberculosis patients complicated with
5、fungal infection,so as to provide reference for the antifungal treatment of suchpatients.Methods:The chromatographic column was ACQUITY UPLCHSS T3 C18 column(2.1 mm 50 mm,1.8m).The mobile phase was acetonitrile(A)-water(containing 0.1%of formic acid)(B),the gradient elution curve was6,the flow rate
6、was 0.3 mL/min,gradient elution,with internal standard of gatifloxacin,electric spray ion source,multi-reaction ion monitoring mode,positive ion mode detection,voriconazole and gatifloxacin ion pair m/z as 350.138/127.08 and 376.2/332.1 respectively.This method was adopted to monitor the plasma conc
7、entration of voriconazole intuberculosis patients of the hospital.Results:Voriconazole within the concentration range of 0.10-21.7 g/mL was ingood linear relationship with the relative peak area(r=0.993 1),and the relative standard deviation(RSD)of stability,extraction recovery rate,and matrix effec
8、t was less than 6%.Conclusion:The method based on UPLC-MS/MS candetermine the concentration of voriconazole in human blood in an easy,quick and accurate manner,providing a strongbasis for the safety and effectiveness of medication in patients with fungal infection.KEY WORDSvoriconazole;therapeutic d
9、rug monitoring;ultra performance liquid chromatography tandem massspectrometry;fungal infection;tuberculosisAnti Infect Pharm,2023,20(10):1076-1080结核病是由结核分枝杆菌引发的慢性传染病,以肺部感染最为多见,临床上,若患者被及时发现,尽早规范性使用抗结核药物治疗,可取得显著临床疗效;若患者未得到及时规范治疗,病原菌可侵入【作者简介】*1韩珂卿(1988),女,硕士,主管药师【通信作者】*2仵倩红(1973),女,主任医师【电子邮箱】其他脏器导致自身免
10、疫力下降,易出现继发感染,而真菌感染是较为常见的一种,以曲霉菌为多见1-2。伏立康唑是第 2 代三唑类广谱抗真菌药物,对曲霉菌属、假丝酵母属都有良好的抗菌作用。伏抗 感 染 药 学Anti Infect Pharm 2023 October;20(10)韩珂卿,等.伏立康唑治疗药物监测方法的建立及其在结核病合并真菌感染患者中的应用1076注:(a)加入标准品和内标的血浆;(b)空白血浆。图 1系统适应性和专属性试验(a)(b)立康唑药品说明书等相关资料显示,伏立康唑是CYP2C19、CYP2C9 和 CYP3A4 的底物,而临床一线抗结核药物利福平对肝药酶活性有诱导作用,二药联用属禁忌,与临床
11、用药需求存在矛盾。本研究采用血药浓度监测这一手段,优化药物治疗,探讨使用利福霉素类药物进行抗结核治疗的患者如何合理地联用伏立康唑。1资料与方法1.1仪器与试药1.1.1仪器Thermo 三重四级杆串联质谱仪,配有离子喷雾离子化源(ESI)、TSQ ENDURA 3.0Tune 软件和 TraceFinder 4.1 General Quan 软件数据处理软件(Thermo 公司);U3000超高效液相色谱系统;XJ220A-SCS 型万分之一天平/225SM-DR 型十万分之一天平(Precisa 公司);VDRTEX-2 型旋涡混合器(其林贝尔仪器制造有限公司);TGL16M 型台式高速离心
12、机、TDL5M 型台式低速离心机(湖南凯达科学仪器有限公司)。1.1.2试药伏立康唑(EDQMCS,批号 0002aU),加替沙星(中国药品生物制品检定所,批号 130518-200402);甲醇、乙腈为色谱纯、醋酸为质谱纯,水为娃哈哈纯净水。1.1.3质谱条件离子源,电喷雾离子化源(ESI);离子喷射电压(IS),3 500 V;离子源温度(TEM),320;源内气体 1(Sheath Gas),35 Arb;源内气体2(Aux Gas),5 Arb。正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测(MRM)。1.1.4色谱条件色谱柱为 ACQUITY UPLCHSST3 C18 柱(2.1 mm50
13、 mm,1.8 m),流动相为乙腈(A)-水(含 0.1%甲酸)(B),梯度洗脱曲线为 6,流速为 0.3 mL/min,柱温为 40,进样量为 1 L,内标为加替沙星,具体为 0 min,15%A;1.5 min,60%A;1.8 min,60%A;2 min,95%A;2.5 min,95%A;2.6 min,15%A。1.2方法1.2.1对照品溶液的配制分别精密称取伏立康唑对照品适量,置于 10 mL量瓶中,加 0.5 mL 乙腈溶解,并以 50%乙腈稀释至刻度,即得对照品储备溶液。精密称取加替沙星对照品,用乙腈溶解并稀释至浓度为 4 g/mL 的内标溶液。1.2.2血浆处理方法取血浆样
14、 100 L,加入 20 L的 0.1%甲酸水溶液和 20 L 内标溶液(4 g/mL),再加入 200 L 乙腈沉淀并涡旋 2 min,将样品在 4以 13 000 r/min 离心 10 min。取上清液 200 L 与400 L 0.1%甲酸水溶液混匀后,取 1 L 进样检测。2结果2.1系统适应性和专属性试验伏立康唑的保留时间为 2.15 min,加替沙星的保留时间为 1.24 min,二者分离良好,且在相应的离子通道中,相互之间没有干扰。详见图 1。2.2标准曲线的绘制平行量取 6 份空白血浆 90 L,分别加入对照品系列溶液 10 L,伏立康唑浓度依次为 0.102、0.204、0
15、.407、1.628、3.255、8.138、16.275、21.700 g/mL,按“1.2.1”项下方法处理后,依照“1.1.3”下条件进样测定,以样品与内标峰面积比值(Y)对浓度(x)绘制回归曲线,权重为 1/x,得到回归方程 Y伏立康唑8.892e1x1.079e1,r0.9931,线 性 范 围 为0.1021.7 g/mL。2.3批内精密度与批间精密度试验分别在 90 L的空白血浆中加入低、中、高 3 种浓度的各抗结核药物对照品溶液 10 L,混匀,得ISSN 1672-7878/CN 32-1726/R Anti Infect Pharm 抗 感 染 药 学 2023 Octob
16、er;20(10)www.抗感染药学.com Tel:86-0512-878063071077低、中、高 3 种不同浓度伏立康唑的血浆样品,按“1.2.1”项下方法处理,依法测定批内与批间精密度(3 d)。详见表 1。常温 24h 稳定性实测浓度(/gmL1)0.570.035.890.1820.480.75RSD(%)5.442.993.68反复冻融 2 次稳定性实测浓度(/gmL1)0.580.025.810.1821.060.61相对标准差(%)2.983.022.88表 2稳定性试验结果基质效应实测浓度(/gmL1)92.362.4095.623.30102.104.37RSD(%)2
17、.593.454.28回收率实测浓度(/gmL1)98.012.33101.712.28102.224.79相对标准差(%)2.382.244.68表 3基质效应与回收率考察结果批内精密度实测浓度(/gmL1)0.580.035.960.1020.670.75RSD(%)5.161.723.64批间精密度实测浓度(/gmL1)0.580.095.880.4621.111.06相对标准差(%)15.667.805.04表 1批内精密度与批间精密度试验2.4稳定性试验配制低、中、高 3 种不同浓度伏立康唑的血浆样品各 3 份,分别考察室温放置 24 h、经过 2 次冻融后各药品的稳定性,按“1.2
18、.1”项下要求对样品进行处理,测定其药物浓度,见表 2。结果显示,各浓度与0 时刻比较,变化率均6%,提示在上述贮存条件下样品较为稳定,不影响本方法对样本的准确测定。2.5回收率试验与基质效应考察配制药物低、中、高浓度的血浆样品各 6 份,按“1.2.1”项下操作后依法进样,记录峰面积。另取经过预处理的血浆空白基质,向其中加入 3 个相应浓度的对照品溶液进行分析。以每一浓度 2 种处理方法得到的峰面积比值计算提取回收率。另取空白血浆 90 L 置于 1.5 mL 离心管,不加内标,按“1.2.1”项下操作,向获得的上清液中分别精密加入标准溶液和内标溶液,配制低、中、高 3 个浓度水平的样品,取
19、 1 L进样分析,测定各色谱峰面积,求出与对应浓度对照品溶液测得峰面积的比值为基质效应,见表 3。结果提示,伏立康唑在人血浆中的提取回收率和基质效应相对标准差(relative standard deviation,RSD)5.0%,定量过程不受基质效应影响。2.6结核病合并真菌感染患者伏立康唑血药浓度应用上述方法对 2022 年 1 月2023 年 6 月在医院住院治疗的 29 例患者的 33 个标本进行了伏立康唑血药浓度测定。患者均经临床医师诊断需要使用伏立康唑,药物达到稳态浓度后晨起服药前抽取患者静脉血 2 mL 置于含 EDTA 的抗凝管中,及时测定血浆药物浓度。各结核患者伏立康唑血药
20、浓度的个体差异较大,见表 4。本研究中 33 例样品所测血药浓度均为稳态谷浓度。伏立康唑的平均谷浓度为(1.291.31)mg/L,最高谷浓度为 4.30 mg/L,最低谷浓度为 0.03 mg/L。使用伏立康唑但未联用利福霉素类药物的患者平均谷浓度为(2.171.50)mg/L,联用利福霉素类药物的患者平均谷浓度为(0.640.61)mg/L,2 组间经比较其差异有统计学意义(P0.05)。根据 中国伏立康唑个体化用药指南推荐意见,推荐中国人群目标血药谷浓度范围为 0.55 mg/L3-4。以 0.55.0 mg/L 为达标的浓度范围,33 例样品共达标 21 例,联用利福霉素类药物患者的伏
21、立康唑血药浓度达标率为 42.11%(8/19),明显低于未联用患者的达标率 92.86%(13/14)。其中,联用利福平的患者的伏立康唑血药浓度达标率为 80.00%(8/10),ISSN 1672-7878/CN 32-1726/R Anti Infect Pharm 抗 感 染 药 学 2023 October;20(10)www.抗感染药学.com Tel:86-0512-878063071078患者患者 1患者 2患者 3患者 4患者 5患者 6患者 7患者 8患者 9患者 10患者 11患者 12患者 13患者 14患者 15患者 16患者 17患者 18患者 19患者 20患者
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