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微生物标本采集、送检及处理原则

一、标本采集的一般原则：
1、病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。
2、无菌采集 应无污染，严格进行无菌操作。
3、根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。
4、注意在不同病程采集不同部位标本。
5、采集标本时要防止传播和自身感染。

二、标本的处理：
1、标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。
2、标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。
3、厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。

Ⅰ 血液及骨髓标本：
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。
常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。
1、采血时间及次数
2、抽血部位及抽血量
3、报告方式：培养5d无菌生长者报告“培养5d无菌生长”。
查见细菌报告菌名和药敏结果。
4、菌血症、败血症的诊断标准：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）；
2）发病星期后血中抗体滴度上升。

Ⅱ 脑脊液标本：
脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。
常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。
1、涂片检查：
(1) 一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
(2)结核分枝杆菌涂片检查
(3)新生隐球菌涂片检查
2、分离培养
3、报告方式：培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。
查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。

Ⅲ 呼吸系统标本：
（一）痰标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有上呼吸道感染。
常见的病原菌主要有肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌和军团菌。
1、标本的采集时间
2、标本采集方法：(1) 自然咳痰法 (2) 气管镜下采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液以提高阳性检出率。
3、涂片检查：
（1）一般细菌涂片
（2）结核分枝杆菌涂片
（3）放线菌及诺卡菌涂片
4、培养：
（1）培养标本的选择：应选择粘液痰作涂片。
（2）痰标本培养前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6)，37ºC水浴90min，使痰液均质化后备用。
（3）分离培养
5、报告方式：痰标本培养24小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群”。
查出的致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的量化指标。

（二）咽拭标本
正常咽拭有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）
常见的病原菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、微球菌和棒状杆菌等）。
1、涂片检查（先培养后涂片）。
2、分离培养
3、报告方式： 同痰标本检查。

Ⅳ 穿刺液标本
穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等。正常穿刺液是无菌的，若从患者穿刺液中查见致病菌或条件致病菌提示该部位有细菌感染。
胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠挨希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌多见。
1、涂片检查（先接种后涂片）
2、分离培养：（1）普通培养 （2）厌氧培养 （3）结核菌培养
3、报告方式：培养24h无细菌生长，报告“培养24h无细菌生长”。
查见细菌，报告菌名和药敏结果。

Ⅴ 泌尿、生殖道标本
（一）尿液标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。
有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105/ml，提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。
常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。
1、中段尿标本采集法
2、涂片检查：
（1）一般细菌及淋病奈瑟菌
（2）念珠菌
（3）结核分枝杆菌
3、一般细菌培养：如培养2d无细菌生长，即可弃去。
（1）倾注平板法
（2）平板接种环法
（3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml，则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数>105/ml”。
4、特殊培养：
（1）淋病奈瑟菌培养
（2）厌氧菌培养
（3）结核分枝杆菌培养
5、报告方式：培养24h细菌生长，报告“24h无细菌生长”。
查见细菌，报告菌名及其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。

（二）生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生。查见病原菌提示有细菌感染。
常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形杆菌等。
1、涂片检查：革兰染色镜检
2、分离培养：
（1）普通培养
（2）淋病奈瑟菌培养
（3）阴道加特纳菌培养
（4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。

Ⅵ 粪便标本
正常情况下肠道中有多种细菌。
引起感染性腹泻的病原微生物有：（1）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、食物中毒、慢性腹泻；（2）真菌性；（3）病毒性。
1、标本采集：（1）自然排便采集；（2）直肠试子。
2、涂片检查：粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。
3、培养：
（1）沙门-志贺菌培养
（2）致病性大肠埃细菌培养
（3）霍乱弧菌培养
（4）副溶血弧菌培养
（5）小肠结肠炎耶尔森菌培养
（6）真菌培养
（7）菌群失调的细菌学检验
4、报告方式：

Ⅶ 脓液及创伤感染分泌物标本
化脓性感染可由单种或多种细菌引起。
常见病原菌主要有金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和结核分枝杆菌、诺卡菌，以及梭杆菌和拟杆菌等。
1、标本采集：（1）开放性脓肿和脓性分泌物；（2）大面积烧伤的创面分泌物；（3）封闭性脓肿
2、涂片检查：根据形态和染色特点，可报告“查见革兰×性细菌，形似× ×菌”或报告“未查见细菌”。
3、培养：
（1）普通培养
（2）厌氧菌培养
（3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养
（4）结核分枝杆菌培养
（5）真菌培养
4、报告方式：查见致病菌，报告菌名和药敏结果。