机能学实验--氨在肝性脑病发生中的作用.ppt

氨在肝性脑病发生中的作用 2肝性脑病肝性脑病（hepatic encephalopathy HE）继发于严重肝病的神经精神综合症继发于严重肝病的神经精神综合症欣快、反应迟缓、睡眠节律的变化，有轻度的扑翼样震颤前驱期 扑翼样震颤Flapping tremor行为异常、嗜睡、定向理解力减退及精神错乱，经常出现扑翼样震颤昏迷前期明显的精神错乱、昏睡等症状明显的精神错乱、昏睡等症状昏睡期7肝性昏迷肝性昏迷(hepatic coma)神志丧失、不能唤醒，没有扑翼样震颤昏迷期8肝性脑病的发生机制肝性脑病氨中毒学说假性神经递质学说-氨基丁酸学说血浆氨基酸失衡学说9氨中毒学说氨中毒学说 在严重肝病时，机体内氨生成过多而肝脏在严重肝病时，机体内氨生成过多而肝脏 对氨的清除能力下降，致使血氨水平显著对氨的清除能力下降，致使血氨水平显著 升高，高浓度的氨通过血脑屏障进入脑组升高，高浓度的氨通过血脑屏障进入脑组 织，引起脑功能障碍。织，引起脑功能障碍。10如何复制肝性脑病的动物模型？如何复制肝性脑病的动物模型？氨的来源增多氨的清除减少肠腔注射复方氯化胺肝叶结扎11实验目的实验目的 学习复制肝功能障碍时氨代谢异常的动物模型的方法学习复制肝功能障碍时氨代谢异常的动物模型的方法 观察肝性脑病时机体的典型表现及血氨水平的变化观察肝性脑病时机体的典型表现及血氨水平的变化 掌握肝性脑病的概念及发病机制掌握肝性脑病的概念及发病机制 12u实验动物实验动物 家兔，体重家兔，体重 甲兔：甲兔：雌雌/雄雄 乙兔：乙兔：u实验器材实验器材 家兔急性手术器械一套，兔固定台，粗棉线，细丝家兔急性手术器械一套，兔固定台，粗棉线，细丝 线，线，1ml1ml、2ml2ml、5ml5ml、10ml10ml注射器各注射器各1 1具具 ，婴儿秤、，婴儿秤、扩散瓶扩散瓶2 2个个u药品药品 1 1利多卡因，利多卡因，1 1肝素，肝素，2.5%2.5%复方氯化铵溶液，复方氯化铵溶液，0.5mol/L0.5mol/L硫酸，纳氏试剂，饱和碳酸钾硫酸，纳氏试剂，饱和碳酸钾13实验方法实验方法 甲兔：结扎大部肝叶注射复方甲兔：结扎大部肝叶注射复方NHNH4 4ClCl 乙兔：不结扎肝叶乙兔：不结扎肝叶 注射复方注射复方NHNH4 4ClCl剑突剑突下做一下做一6-8cm6-8cm长切口长切口-避免气胸避免气胸称重、分组称重、分组-甲兔和乙兔重量相同甲兔和乙兔重量相同/相近相近 固定固定-四肢伸展仰卧位？四肢伸展仰卧位？剪毛、麻醉剪毛、麻醉（各（各2ml2ml）-颈部、上腹部颈部、上腹部局部麻醉？局部麻醉？甲兔结扎肝叶，找到十二指肠，穿牵引线乙兔不结扎肝叶，找到十二指肠，穿牵引线 颈总动脉插管颈总动脉插管-取血取血1mL1mL测血氨测血氨(取血后肝素化取血后肝素化)提前取胶布剪口游离长度151618 甲兔甲兔u出现大抽搐时出现大抽搐时再次放血再次放血1ml1ml测血氨。记录所用复方测血氨。记录所用复方NHNH4 4ClCl总量和时间总量和时间。乙兔乙兔u与甲兔出现大抽搐时注射的复与甲兔出现大抽搐时注射的复方方NHNH4 4ClCl量和时间相同时，从颈总量和时间相同时，从颈总动脉再次放血动脉再次放血1ml1ml测血氨。测血氨。u继续推注继续推注复方复方NHNH4 4ClCl直至直至乙兔乙兔出出现大抽搐，记录所用复方现大抽搐，记录所用复方NHNH4 4ClCl总总量和时间量和时间。向肠腔注射复方NH4Cl（5ml/5min)小结第一次取血时间第二次取血时间、弃掉肝素停止注射复方NH4CL注射器的使用大抽搐：四肢伸直，坚硬如柱，头尾昂起，脊柱挺硬迅速19血氨测定方法血氨测定方法(纳氏试剂显色法纳氏试剂显色法)饱和碳酸钾溶液饱和碳酸钾溶液1ml血液血液1ml 立即以玻璃棒蘸硫酸1滴迅速盖上扩散瓶倾斜扩散瓶将血液及碳酸钾充分混匀（45度角旋转10分钟，放置0分钟）取出玻棒,取纳氏试剂3ml将玻棒上含氨硫酸洗入试管中肉眼观察液体颜色,颜色深浅反映血液氨的浓度高低(可用、+、+、+、+表示颜色深浅)玻棒用前调整好高度 蘸液约1cm 勿使玻棒与血液及瓶内壁接触提前20观察项目观察项目 氨在肝性脑病发生中的作用观察氨在肝性脑病发生中的作用观察组组 出现大抽搐所需出现大抽搐所需 出现大抽搐出现大抽搐 血氨浓度血氨浓度 别别 NH4Cl用量用量(ml)所需时间所需时间(min)第第1次次 第第2 次次 呼吸呼吸 肌张力肌张力甲兔乙兔21注意事项注意事项原则上选择体重相差不超过原则上选择体重相差不超过250g的家兔进行对照的家兔进行对照 专人测定血氨专人测定血氨肝叶结扎线置于肝叶根部，避免勒破肝脏肝叶结扎线置于肝叶根部，避免勒破肝脏复方复方NHNH4 4ClCl切勿漏入腹腔切勿漏入腹腔乙乙兔与甲兔兔与甲兔同时同时推注推注复方复方NHNH4 4ClCl或或晚于晚于甲甲兔兔？发生大抽搐时迅速放血发生大抽搐时迅速放血0 5min 10min 15min 20min 25min 30min5ml 10ml 15ml 20ml 25ml 30ml 35ml 大抽搐：四肢伸直，坚硬如柱，头尾昂起，脊柱挺硬22讨论要点讨论要点1.肝性脑病的概念肝性脑病的概念2.模型是如何复制的（氨中毒学说）模型是如何复制的（氨中毒学说）3.实验数据横纵向对比分析实验数据横纵向对比分析4.实验现象的分析（氨对脑的毒性作用）实验现象的分析（氨对脑的毒性作用）23观察项目观察项目呼吸运动、肌张力、抽搐。呼吸运动、肌张力、抽搐。氨在肝性脑病发生中的作用观察氨在肝性脑病发生中的作用观察组组 出现大抽搐所需出现大抽搐所需 出现大抽搐出现大抽搐 血氨浓度血氨浓度 别别 NH4Cl用量用量(ml)所需时间所需时间(min)第第1次次 第第2次次甲兔乙兔24氨对脑代谢功能的影响1、干扰脑细胞能量代谢、干扰脑细胞能量代谢2、使脑内神经递质改变、使脑内神经递质改变3、氨对神经细胞膜的抑制作用、氨对神经细胞膜的抑制作用25参考结论：参考结论：血氨增高是肝性脑病的重要诱因血氨增高是肝性脑病的重要诱因 甲兔为肝性脑病，乙兔为急性氨中毒甲兔为肝性脑病，乙兔为急性氨中毒 肝脏具有解氨毒的作用，但有一定限度肝脏具有解氨毒的作用，但有一定限度 氨对大脑具有毒性作用氨对大脑具有毒性作用