食品化学与营养学实验指导.doc
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1、食品化学与营养实验指导主要内容:实验一 美拉德反应初始阶段的测定实验二 方便食品中淀粉-化程度测定实验三 油脂氧化的测定实验四 蛋白质功能性质的测定实验五 膳食调查与评价实验六 个人日常膳食食谱设计实验一 美拉德反应初始阶段的测定一、实验目的掌握利用模拟实验测定美拉德反应初始阶段的测定。二、实验原理 美拉德反应即蛋白质、氨基酸或胺与碳水化合物之间的相互作用。美拉德反应开始,以无紫外吸收的无色溶液为特征。随着反应不断进行,还原力逐渐增强,溶液变成黄色,在近紫外区吸收增大,同时还有少量糖脱水变成5-羟甲基糖醛(HMF),以及发生键断裂形成二羰基化合物和色素的初产物,最后生成类黑精色素。本实验利用模
2、拟实验:即葡萄糖与甘氨酸在一定pH缓冲液中加热反应,一定时间后测定HMF的含量和在波长为285nm处的紫外消光值。HMF的测定方法是根据HMF与对氨基甲苯和巴比妥酸在酸性条件下的呈色反应。此反应常温下生成最大吸收波长的550nm的紫红色物质。因不受糖的影响,所以可直接测定。这种呈色物对光、氧气不稳定,操作时要注意。三、仪器与试剂仪器:分光光度计、水浴锅、试管等。试剂:均以相应的AR级试剂配制。1巴比妥酸溶液:称取巴比妥酸500mg,加约70mL水,在水浴加热使其溶解,冷却后转移入100mL容量瓶中,定容。2对氨基甲苯溶液:称取对氨基甲苯10.0g,加50mL异丙醇在水浴上慢慢加热使之溶解,冷却
3、后移入100mL容量瓶中,加冰醋酸10mL,然后用异丙醇定容。溶液置于暗处保存24小时后使用。保存4-5天后,如呈色度增加,应重新配制。31mol/L葡萄糖溶液。40.1mol/L甘氨酸溶液。四、操作步骤1、取5支试管,分别加入5mL 1.0mol/L葡萄糖溶液和0.1mol/L甘氨酸溶液,编号为A1,A2,A3,A4,A5。A2、A4调pH到9.0,A5加亚硫酸钠溶液。5支试管置于90水浴锅内并记时,反应1h,取A1,A2,A5管,冷却后测定它们的258nm紫外吸收和HF值。2、HMF的测定:A1,A2,A5各取2.0mL于另三支试管中,加对一氨基甲苯溶液5mL。然后分别加入巴比妥酸溶液1m
4、L,另取一支试管加A1液2mL和5mL对一氨基甲苯溶液,但不加巴比妥酸液而加1mL水,将试管充分振动。试剂的添加要连续进行,在12min内加完,以加水的试管作参比,测定在550nm处吸光度,通过吸光度比较A1,A2,A5中HMF的含量可看出美拉德反应与哪些因素有关。3、A3,A4两试管继续加热反应,直到看出有深颜色为止,记下出现颜色的时间。五、注意事项 HMF显色后不稳定,比色时要快。实验二、方便食品中淀粉-化程度测定(一)实验目的与意义 掌握淀粉糊化的测定方法,了解提高淀粉利用率的原理与方法,熟悉碳水化合物常规的实验方法。(二)原理对于淀粉性食品,糊化度的高低是衡量其生熟程度的指标,而糊化度
5、的高低可用淀粉的-化程度来表示。淀粉在糖化酶的作用下可转化为葡萄糖,且其糊化度越大,-化程度越高,转化生成的葡萄糖的量就越多。用碘量法测定转化葡萄糖的含量,根据滴定结果计算-化程度。C6H12O6I2+NaOH C6H12O7 NaI+H2OI2(过量部分) +2NaOH = NaOINaI+H2ONaOINaI+2HCl =NaCl+ I2+H2OI2+Na2S2O3 = NaI+ Na2S4O6(三)材料与试剂1. 实验材料:膨化食品、方便米饭、方便面等常见淀粉含量比较高的食品。2. 试剂:糖化酶:11-12波美度的生麦芽汁30-40ml 稀释至100ml。0.1M的硫代硫酸钠标准溶液。0
6、.1M的碘标准溶液:1.28克碘和3克碘化钾溶解后移入100毫升棕色容量瓶中,定容至刻度,置于避光处待用。10硫酸溶液。1M盐酸溶液。0.1M氢氧化钠溶液。3. 仪器:水浴锅、真空泵、天平。(四)操作1取3个碘量瓶A,B,C,分别称取粉碎后经60目筛的样品1.00克两份,置于A,B瓶中,以C瓶做空白对照。2分别加入50mL水,并将A瓶放在电炉上微沸20min,然后冷却至室温。3向各瓶加入稀释的糖化酶液2mL,摇匀后一起置于50恒温水浴中保温1h。4取出,立即向每瓶中加入1M盐酸溶液2mL,终止糖化。5将各三角瓶内反应物移入容量瓶定容至100ml后过滤。6分别取滤液10 mL置于250 mL碘量
7、瓶中,准确加入0.1M的碘标准溶液5mL及0.1M氢氧化钠溶液18mL,盖严放置15min。7打开瓶塞,迅速加入10硫酸溶液2 mL,以0.1M的硫代硫酸钠标准溶液滴定至无色,记录所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数。(五)计算-化程度=(V0-V2)/(V0-V1)*100%V0-滴定空白溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数V1-滴定糊化样品所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数V2-滴定未糊化样品所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数(六)注意事项1在酶水解过程中应如何保证充分的加酶量和水解时间。2糖化酶的最适作用温度为50 摄氏度,应控制温度不要过高或过低。(七)思考题 1测定淀粉糊化度的其他方
8、法有哪些? 2如何测定在酶解过程中选用酶的种类?实验三 油脂氧化的测定实验目的 掌握油脂酸价、碘价、皂化价、过氧化值等指标的测定方法。一、油脂酸价的测定(一)实验原理酸价的测定是根据酸碱中和的原理进行。即以酚酞作指示计,用氢氧化钾标准溶液进行滴定中和油脂中的游离脂肪酸。酸价越高,游离脂肪酸含量越高。 (二)仪器和试剂1仪器碱式滴定管、锥形瓶 250ml、试剂瓶、容量瓶、移液管、称量瓶、天平(感量0.001g)、量筒 100ml2试剂0.1mol/L氢氧化钾(或氢氧化钠)标准溶液中性乙醚-乙醇(2:1)混合溶剂:临用前以酚酞作指示剂,用0.1mol/L氢氧化钾中和至刚变色。1%酚酞乙醇指示剂:(
9、三) 实验步骤1按表1称取均匀的油样注入锥形瓶。2加入中性乙醚-乙醇溶液50ml,摇动,使油样完全溶解。3加2-3滴酚酞指示剂,用0.1mol/L的碱液滴定至出现微红色在30秒内不消失,记下消耗的碱液体积V 表1 油样取样量估计酸价油样量准确度750.10.0002(四)结果计算1以酸价表示油脂酸价按下列公式计算 酸价(mg KOH /g 油)=V C56.1 /W式中 V-滴定时消耗的氢氧化钾溶液体积(ml)C-氢氧化钾溶液浓度(mol/L)56.1-氢氧化钾的摩尔质量W-油样质量双试验结果允许差不超过0.2mg KOH/g油,求其平均数,即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。2以百分含量
10、表示油脂中所含游离脂肪酸的数量除用酸价表示外,还可用游离脂肪酸的百分含量来表示: FFA% = AV 脂肪酸分子量/56.1081/10对于某一脂肪酸,其分子量为常数,于是有 f =脂肪酸分子量/56.108 1/10则 FFA%=f AV显然不同的脂肪酸,其f 值各异,由它们表示的百分含量也不同。用酸价换酸成FFA的百分含量公式如下油酸%=0.503 AV(最常用的换算关系) 月桂酸%=0.356AV软脂酸%=0.456AV蓖麻酸%=0.530 AV芥酸%=0.602 AV亚油酸%=0.499AV(五)注意事项测定蓖麻油时,只用中性乙醇而不用混合溶剂。测定深色油的酸价,可减少试样用量,或适当
11、增加混合溶剂的用量,以百里酚酞或麝香草酚酞作指示剂,以使测定终点的变色明显。滴定过程中如出现混浊或分层,表明由碱液带进水过多,乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。一旦出现此现象,可补加95%的乙醇,促使均一相体系的形成。二、油脂碘价的测定(一)实验原理油脂碘价(IV):100g油脂所能吸收碘的克数。根据碘价的定义,化学反应在碘与双键之间进行,将氯化碘溶于冰醋酸中就得到韦氏碘牙液,过量的氯化碘的冰醋酸可与油脂中的不饱和脂肪酸发生加成反应,而生成饱和的卤素衍生物:I2 + Br2 2IBrCH=CH + IBr CHCH | | I Br反应后多余的氯化碘以碘化钾(KI)还原,析出的碘用硫代硫酸钠标准
12、溶液滴定。IBr + KI I2+KBrI2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6根据硫代硫酸钠的用量并与空白试验,即可求出碘的实际加成量。碘价越高,说明油脂中双键越多,碘价降低,说明油脂发生了氧化。(二)仪器和试剂1仪器碘量瓶 250或500ml、滴定管 50ml、大肚吸管 25ml、容量瓶1000ml、分液漏斗、洗气瓶、烧杯、 玻棒、分析天平(感量0.0001g)2试剂0.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液、15%碘化钾、0.5%淀粉指示剂、四氯化碳或三氯甲烷、盐酸、硫酸、碘 、高锰酸钾、冰醋酸 、氯化碘、三氯化碘韦氏碘液 其配制方法有三种1取25克氯化碘溶于1500ml冰醋酸中。2
13、称取纯碘13克溶于1000ml冰醋酸中,从中量出150ml作调节韦氏碘液用,其余碘液通入经过洗涤和干燥的氯气,使之与碘作用生成氯化碘。通入的氯气,使溶液由深褐色变到透明的橙红色为止。氯化过量时,则用碘液调节,或将氯气通至用硫代硫酸钠溶液标定时,其用量比未通入氯气前大一倍为止。标定方法:分别量取碘液和韦氏液各20ml各加入20ml15%碘化钾溶液和水100ml,分别用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液进行滴定。为使韦氏碘液更加稳定,可在水浴锅上加热20分钟,冷却后注入棕色瓶,置暗处备用。3取三氯化碘7.9g和纯碘8.7g,分别溶于冰醋酸中,合并两液,再用冰醋酸稀释至1000ml储于棕色瓶中备用。(三
14、)油样用量碘价数值与试样用量见表2表2 油样用量与IV的关系油脂碘价油样用量范围(g)20以下1.2000-1.220020-400.7000-0.720040-600.4700-0.490060-800.3500-0.370080-1000.2800-0.3000100-1200.2300-0.2500120-1400.1900-0.2100140-1600.1700-0.1900160-1800.1500-0.1700180-2000.1400-0.1600 (四)实验步骤1. 按表2数量称取经干燥过滤的油样(准确至0.0002g)注入干洁的碘量瓶中。2. 往碘量瓶中加入20ml氯仿或四氯
15、化碳溶解油样后。加入25ml韦氏碘液,立即加塞(塞和瓶口均涂以碘化钾溶液,以防碘挥发),摇匀后,将瓶子放于黑暗处。3. 30分钟后(碘值在130以上时需放置60分钟)立即加入15%碘化钾溶液20ml和水100ml,不断摇动,用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定至溶液呈浅黄色时,加入1ml淀粉指示剂,继续滴定,直至蓝色消失。4. 相同条件下,不加油样做两个空白试验,取其平均值作计算用。(五)结果计算油脂碘值按下列公式计算 碘价(gI/100g油)=(V2V1)C0.1269/W100式中 V1-油样用去硫代硫酸钠溶液体积ml V2-空白试验用去硫代硫酸钠溶液体积ml C-硫代硫酸钠溶液的浓度(mol
16、/L) W-油样质量 0.1269- 1/2碘的毫摩尔质量,g/mmol 双试验结果允许差,碘值在100以上者不超过1;碘值在100以下者不超过0.6求其平均值即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。(六)注意事项1配制韦氏碘液的冰醋酸质量必需符合要求,且不能含有还原性物质。鉴定是否含有还原性物质的方法:取冰醋酸2ml,加10ml蒸馏水稀释,加入1mol/L高锰酸钾0.1ml,所呈现的颜色应在2小时内保持不变。如果红色退去,说明有还原性物质存在。可用下法精制:取冰醋酸800ml放入圆底烧瓶内,加入8-10g高锰酸钾,接上回流冷凝器,加热回流约1小时后,移入蒸馏瓶中进行蒸馏,收集118-119间
17、的馏出物。2氯气是以盐酸加入高锰酸钾中制得的。制氯时,浓盐酸要缓缓加入,如果反应太慢,可以微微加热。所产生的氯气应通过水洗及浓硫酸干燥,方可通入碘液内。通氯气应在通风橱内进行,防止中毒。3韦氏碘液和硫代硫酸钠溶液稳定性较差,为使实验结果精确、可靠,必需做空白试验。另外,实验前需用重铬酸钾重新标定硫代硫酸钠溶液。4韦氏碘液由大肚吸管中流下的时间,各次试验应取得一致。碘液与油样接触的时间,应注意维持恒定,否则易产生误差。 三、 油脂皂化价的测定(一)实验原理油脂的皂化价(SV):完全皂化1克油脂所需氢氧化钾的毫克数。将油脂与过量的0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液回流加热,使其完全皂化。之后用盐酸标
18、准溶液滴定剩余的氢氧化钾,以酚酞为指示剂反应终点。由所耗碱量及试样重量即可算出皂化价。 (二)仪器和试剂 1仪器锥形瓶 250ml、酸式滴定管50ml、回流冷凝器、恒温水浴锅、吸管 25ml、烧杯、试剂瓶、天平(感量0.001g)2试剂1%的酚酞指示剂、0.5mol/L盐酸标准溶液中性乙醇:用0.1mol/L氢氧化钾中和至酚酞指示剂恰好变色。0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液:称取30克分析纯氢氧化钾溶于己于1升纯度为95%的精馏乙醇中。本实验所用的乙醇必须精制,因为乙醇内常含有醛,遇碱后缩合,脱水,不断进行下去会生成长碳链的树脂状物质,其中CH=CHCHO为一发色基团(呈黄褐色)。因此,如不除
19、去醛,会影响滴定时的终点确定。精馏乙醇:称取硝酸银2克,加入水3毫升,注入1升乙醇中,用力振摇。另取氢氧化钾3克溶于15毫升热乙醇中,冷却后,注入主液充分摇动,静置12周待澄清后吸取清液蒸馏。(三)实验步骤1称取混合均匀试样2克(准确至0.001克)于锥形瓶内。2加入0.5mol/LKOH乙醇溶液25ml,接上回流冷凝管,在水浴上煮沸约30分钟。3待煮液透明后,停止加热,取下锥形瓶用10ml的中性乙醇溶液冲洗冷凝管下端,加酚酞指示剂数滴,趁热用0.5mol/L盐酸溶液滴定至红色消失。4同时做一空白实验。(四)结果计算油脂的皂化价按下式计算皂化价(mgKOH/g油)=(V2V1)C56.1/W
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